清開靈注射液對進(jìn)行期尋常型銀屑病患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T
【摘要】 目的 明確進(jìn)行期尋常型銀屑病患者外周血T細(xì)胞及亞群是否存在異常；探討進(jìn)行期尋常型銀屑病患者清開靈注射液治療前后外周血CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞變化情況。 方法 40例患者隨機(jī)分為治療組和對照組，每組20例。治療組予清開靈注射液1ml/kg加入5％GS 250～500ml（糖尿病患者改用生理鹽水）中靜滴，每日1次；內(nèi)服湯劑“土槐飲”（加減），1劑/d，分2次服；“加味黃芩膏”外用，2次/d。對照組予中藥湯劑“土槐飲”（加減）內(nèi)服及“加味黃芩膏”外用。治療4周觀察2組的療效。治療開始和治療結(jié)束檢測患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞。選擇門診健康體檢者20例作為健康對照組。結(jié)果 2組在PASI積分、痊愈率、顯效率、總有效率方面差異無顯著性(P＞0.05)，在CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞以及CD4+／CD8+改善方面治療組優(yōu)于對照組（P＜0.05）。結(jié)論 清開靈注射液對進(jìn)行期尋常型銀屑病療效肯定，其在改善癥狀的同時亦能糾正患者外周血T細(xì)胞及其亞群的失衡狀態(tài)。【關(guān)鍵詞】 清開靈注射液 尋常型銀屑病 T細(xì)胞
Effect of Qingkailing injection on CD3+，CD4+ and CD8+T cells in peripheral blood of patients with development psoriasis vulgaris
【Abstract】 Objective To definite the changes of CD3+，CD4+，CD8+ T cells in peripheral blood of patients with development psoriasis vulgaris （PV）.To investigate effect of Qingkailing injection on CD3+、CD4+、CD8+ T cells in peripheral blood of patients with PV.Methods 40 cases of PV were observed，20 cases were chosen randomly as treating group and the others as control group.20 cases were chosen randomly from the healthy persons as confnols.Patients of the treating group injected with Qingkailin Injection (1ml/kg adding into 5%GS 500ml，once a day);and orally took Tuhuaiyin decoction 200ml，twice a day; and locally applied Jiaweihuangqingao twice a day.Patients of the control group only orally took Tuhuaiyin decoction 200ml twice a day;and locally applied Jiaweihuangqingao twice a day.All patients were treated for 4 weeks.Results CD3+，CD4+ and CD8+T cells of peripheral blood of patients with PV were all improved in the treating group and the control group.Conclusion Qingkailing injection has definitely effec on PV，and can correct the unbalance of CD3+，CD4+ and CD8+T cells in peripheral blood of patients with PV.
【Key words】 Qinkailing injection psoriasis vulgaris T cells
銀屑病是T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病［1］。銀屑病患者存在免疫學(xué)異常，文獻(xiàn)報道銀屑病患者外周血T細(xì)胞及其亞群的變化結(jié)論不一。清開靈注射液治療銀屑病有效。清開靈注射液治療銀屑病的機(jī)制，文獻(xiàn)多從學(xué)的角度進(jìn)行闡述，現(xiàn)代實(shí)驗研究相對缺乏。本試驗探討進(jìn)行期尋常型銀屑病患者清開靈注射液治療前后外周血CD3+、CD4+和CD8+T細(xì)胞變化，從免疫學(xué)角度試圖闡述清開靈注射液對進(jìn)行期尋常型銀屑病患者的療效。
1 資料與方法
1.1 一般資料 本試驗共收集進(jìn)行期尋常型銀屑病完整資料40例，按住院先后隨機(jī)分為治療組和對照組，每組各20例。另選擇門診健康體檢者20例，作為健康對照組。
治療組：共20例，其中男12例，女8例；年齡最小者20歲，最大者55歲，平均年齡(33.95±10.92)歲，病程1年以內(nèi)者2例，3年以內(nèi)者7例，10年以內(nèi)者9例，10年以上者2例；皮損形態(tài)：以點(diǎn)滴狀和混合型為主，PASI積分最小者10.9，最高者35，平均積分24.31±6.97。對照組：共20例，其中男9例，
女11例；年齡最小者18歲，最大者44歲，平均年齡(31.95±8.23)歲；病程1年以內(nèi)者1例，3年以內(nèi)者5例，10年以內(nèi)者10例，10年以上者4例；皮損形態(tài)：以點(diǎn)滴狀和混合型為多；PASI積分最小者11.6，最高者32.7，平均積分22.96±7.75。
1.2 病例入選標(biāo)準(zhǔn) 上符合尋常型銀屑病診斷且為進(jìn)行期；常規(guī)檢查除外其它器質(zhì)性病變。入院期間及入院前1個月內(nèi)未用皮質(zhì)類固醇、免疫抑制劑、迪銀片和維A酸。
1.3 檢測方法及藥物提供 (1) 抽取患者及健康體檢者外周靜脈血3ml，加肝素(20u/ml)抗凝，用淋巴細(xì)胞分離液制備淋巴細(xì)胞懸液，采用間接免疫熒光染色后再用流式細(xì)胞儀檢測法測定T細(xì)胞亞群。取已制備的淋巴細(xì)胞懸液各100μl，分別加入1∶100稀釋的抗CD3+、CD4+、CD8+單克隆抗體即OKT3、OKT4、OKT8單克隆抗體(美國Dako公司產(chǎn))100μl，室溫孵育30min，加入1∶200稀釋的二抗(羊抗鼠IgG-FITC)100μl，室溫孵育30min，最后加PBS液2ml上機(jī)檢測。試驗中用PBS液分別代替一抗、二抗作陰性對照。采用美國BD公司生產(chǎn)的FACSCalibur型流式細(xì)胞儀檢測，每份標(biāo)本檢測10000個細(xì)胞，計數(shù)熒光標(biāo)記陽性的細(xì)胞，測量的數(shù)據(jù)輸入，用相應(yīng)的軟件程序進(jìn)行資料處理，輸出數(shù)據(jù)結(jié)果，并進(jìn)行t。(2) 清開靈注射液由山西太行藥業(yè)股份有限公司提供（批號：020301）；“加味黃芩膏”由江蘇省中醫(yī)院制劑室提供；中藥湯劑“土槐飲”的中藥飲片由江蘇省中醫(yī)院中藥房提供。
1.4 觀察指標(biāo)和療效判定 (1)安全性檢測：血、尿、大便常規(guī)，肝、腎功能；(2)癥狀積分改變情況：采用PASI積分系統(tǒng)，衡量銀屑病皮損受累面積及嚴(yán)重程度，實(shí)驗開始及實(shí)驗結(jié)束各記錄1次PASI積分；(3)患者治療前后及健康對照者的T細(xì)胞及其亞群。
1.5 學(xué)方法 全部數(shù)據(jù)資料采用統(tǒng)計學(xué)軟件 SPSS11.5軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。計量資料用x±s表示，采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗。P＜0.05認(rèn)為差異有顯著性，P＜0.01認(rèn)為差異有非常顯著性，P＞0.05認(rèn)為差異無顯著性。
2 結(jié)果
2組治療前后經(jīng)配對t檢驗，P＜0.01，組間經(jīng)t檢驗，P＞0.05，差異無顯著性，見表1。
表1 2組治療前后PASI積分比較 (x±s)
治療組在痊愈率、顯效率和總有效率都高于對照組，但經(jīng)χ2檢驗P＞0.05，差異無顯著性，見表2。
表2 2組療效比較 (例)
注:痊愈率＝痊愈／n×100％；顯效率＝（痊愈＋顯效）／n×100%；總有效率=(痊愈+
顯效+好轉(zhuǎn))/n×100%
表3 2組治療前后T細(xì)胞亞群變化情況 （x±s）
2組治療前CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞均明顯低于健康對照組（P＜0.05），CD4+/CD8+明顯高于健康對照組（P＜0.05），治療后2組CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞均有提高，CD4+/CD8+比值下降，治療組優(yōu)于對照組（P＜0.05），見表3。
3 討論
中藥針劑清開靈注射液系在清代《溫病條辨》“安宮牛黃丸”基礎(chǔ)上由北京中大學(xué)研制的復(fù)方制劑。其主要藥物成分為：板藍(lán)根、金銀花、梔子、水牛角、珍珠母、黃芩苷、膽酸、豬去氧膽酸。清開靈注射液雖然不是為治療銀屑病而開發(fā)研制，該藥的主治病（證）中也沒包括銀屑病，但從該藥的藥物構(gòu)成和功效來看，與銀屑病的病癥相吻合，從中的角度可用于銀屑病的治療。“土槐飲”和“加味黃芩膏”是江蘇省中醫(yī)院皮膚科常用治療銀屑病的2個方劑，“土槐飲”主要由土茯苓、生槐花及其它中藥加減變化組成，全方有清熱解毒、涼血活血的功效；“加味黃芩膏”系江蘇省中醫(yī)院院內(nèi)制劑，主要由黃芩、枯礬等藥物組成，具有清熱解毒、消炎止癢功效。以上三方同用，具有清熱解毒、涼血活血、消炎止癢的功效，達(dá)到改善銀屑病的目的。
本試驗提示進(jìn)行期尋常型銀屑病患者，治療前外周血CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞明顯低于健康對照組（P＜0.05)，治療后患者T細(xì)胞及其亞群隨患者的癥狀改善及PASI積分的降低而趨于正常，提示 T細(xì)胞參與了銀屑病的發(fā)病過程。從T細(xì)胞的正常生理可初步推測進(jìn)行期尋常型銀屑病患者外周血變化的原因。Baker［2］認(rèn)為在遺傳及其它因素的影響下，患者的T細(xì)胞在干細(xì)胞水平即有損傷，導(dǎo)致發(fā)育成熟后的外周血中T細(xì)胞及其亞群的變化。由于人體的T細(xì)胞各亞群均屬免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，在維持免疫調(diào)節(jié)平衡上起重要作用，Th與Ts 是相互制約，正常情況下保持動態(tài)平衡。CD8+T細(xì)胞通過對B細(xì)胞的直接抑制，抑制體液反應(yīng)；又通過抑制CTL細(xì)胞使細(xì)胞免疫功能減弱，故當(dāng)循環(huán)中的CD4+及CD8+T細(xì)胞由正常動態(tài)平衡狀態(tài)變?yōu)槭Ш鉅顟B(tài)時，即可引起患者的細(xì)胞免疫和體液免疫功能的變化，導(dǎo)致免疫性疾病的發(fā)生。患者外周血T細(xì)胞及其亞群的變化也可能是由于T細(xì)胞被激活后，由外周血浸潤到皮損中，由此導(dǎo)致外周血T細(xì)胞及其亞群的變化。Gettib［3］等指出，當(dāng)受到抗原刺激時，朗格漢斯細(xì)胞（Langerhans cell，LC）在攝取并加工處理抗原后向T淋巴結(jié)區(qū)遷移時逐漸分化為成熟的樹突狀細(xì)胞，在淋巴結(jié)的T淋巴細(xì)胞區(qū)激活幼稚的T細(xì)胞（naive T cells），被激活的T細(xì)胞由于趨化因子及其它因素的作用回到真皮，分泌一系列細(xì)胞因子，使角質(zhì)形成細(xì)胞表達(dá)HLA－DR+抗原，同時造成炎癥和表皮增生。HLA－DR+角質(zhì)形成細(xì)胞又激活其它T細(xì)胞，導(dǎo)致銀屑病皮損的發(fā)生和存在。
本試驗顯示進(jìn)行期尋常型銀屑病患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞明顯低于健康對照組（P＜0.05），CD4+/CD8+比值高于健康對照組（P＞0.05），但這一變化是銀屑病的繼發(fā)性改變，還是銀屑病的病因之一，目前還不清楚。因此銀屑病患者外周血T細(xì)胞及其亞群變化的機(jī)制也尚未完全清楚。本試驗治療組和對照組經(jīng)4周治療，2組患者病情明顯好轉(zhuǎn)、PASI積分下降，患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞以及CD4+/CD8+比值趨于正常。經(jīng)學(xué)處理，在 PASI積分改善、痊愈率、顯效率、總有效率方面治療組優(yōu)于對照組，但2組間差異無顯著性（P＞0.05）；在CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞以及CD4+/CD8+比值改善方面，治療組優(yōu)于對照組（P＜0.05），提示清開靈注射液對進(jìn)行期尋常型銀屑病有效。至于2組在T細(xì)胞亞群以及CD4+/CD8+比值改善和PASI積分下降不一致的矛盾，一方面可能系銀屑病發(fā)病機(jī)制所致，即T細(xì)胞及其亞群的變化在先，皮損變化滯后；另一方面，可能與試驗選擇的樣本數(shù)量偏少有關(guān)。
鑒于銀屑病病因和發(fā)病機(jī)制的復(fù)雜性，清開靈注射液對進(jìn)行期尋常型銀屑病的療效可能通過多種途徑而獲得。初步推測有下面幾種可能的途徑：(1)對參與異常免疫反應(yīng)的T細(xì)胞和抗原遞呈細(xì)胞的作用，抑制抗原遞呈細(xì)胞對抗原的識別、處理，抑制MHC復(fù)合物的表達(dá)，弱化T細(xì)胞活化所必需的第一、二信號的表達(dá)，進(jìn)而影響T細(xì)胞活化，影響細(xì)胞因子及炎癥介質(zhì)的表達(dá)；(2)直接抑制T細(xì)胞的活化，對T細(xì)胞活化的環(huán)節(jié)直接進(jìn)行干預(yù)，干擾T細(xì)胞活化；(3)改變和/或抑制角質(zhì)形成細(xì)胞膜表面分子的表達(dá)，封閉角質(zhì)形成細(xì)胞表面相關(guān)受體，降低角質(zhì)形成細(xì)胞對炎癥介質(zhì)和/或T細(xì)胞的敏感性，抑制角質(zhì)形成細(xì)胞過度增殖；(4)對細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)的直接影響，包括改變其構(gòu)型，阻止其與對角質(zhì)形成細(xì)胞和T細(xì)胞的結(jié)合；(5)直接抑制角質(zhì)形成細(xì)胞過度增殖；(6)通過其它更為復(fù)雜的途徑對T細(xì)胞、抗原遞呈細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞和炎癥介質(zhì)施加影響，改善銀屑病。
由于本試驗的患者均為住院患者，出于治療上的考慮，未設(shè)單純清開靈治療組以觀察療效，這是本試驗的不足之處。由于本試驗治療組和對照組都只有20例患者，健康對照組亦只有20例，故本試驗對進(jìn)行期尋常型銀屑病患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞的檢測結(jié)果是否穩(wěn)定可靠尚不清楚，清開靈注射液對其治療結(jié)果是否具有廣泛性亦不能確定。由于T細(xì)胞及其亞群在皮損中亦有分布，且可能在銀屑病的發(fā)病機(jī)制中扮演重要角色，但由于多方面的原因未能檢測患者治療前后皮損中T細(xì)胞及其亞群的變化情況，以從多方面評價清開靈注射液對進(jìn)行期銀屑病的治療效果。
【參考文獻(xiàn)】
1 Barker JN.Psoriasis as a T cell-mediated autoimmune disease.Hos med， 1998， 59(7):530-533.
2 Baker BS，F(xiàn)ry L.The immunology of psoriasis.Br J Dermatol，1992，126：1.
3 Gottlieb AB，Lifshibi B，F(xiàn)u SM，et al.Detection of a gamma interferon-induced protein Ip-10 in psoriasis plaques.J Exp Med 1986，164(4):1013-1028.
【清開靈注射液對進(jìn)行期尋常型銀屑病患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T】相關(guān)文章：
２型糖尿病患者腹部手術(shù)后腸瘺的早期護(hù)理03-02
老年2型糖尿病患者低血糖癥的頻率分析03-26
談急性心肌梗死患者外周血來源03-18
關(guān)于中醫(yī)證型與高血壓病患者血漿同型半胱氨酸及血脂關(guān)系的臨床醫(yī)03-08
外周血單個核細(xì)胞中肺炎衣原體的分離、培養(yǎng)及傳代03-08
胺碘酮注射液治療快速房顫的療效觀察03-16
糖尿病患者的家庭護(hù)理03-16